丙二酸鈉批發商

① 丙二酸鈉的介紹

丙二酸鈉為白色結晶。可溶於水，1%水溶液pH為8-9，不溶於醇；醚和苯。用於醫葯；染料和香料的原料。丙二酸鈉與丁醇酯化得到丙二酸二丁酯，用於生產磺胺-6-甲氧嘧啶；與乙醇酯化得到丙二酸二乙酯，用於生產催眠葯巴比妥；也用於生產增效聯磺。

② 為什麼在進行呼吸作用的線粒體中加入丙二酸鈉,呼吸作用立即停止

因為阻斷了生物氧化中的呼吸鏈.

③ 為什麼在進行呼吸作用的線粒體中加入丙二酸鈉，呼吸作用立即停止

因為阻斷了生物氧化中的呼吸鏈。

④ 丙二酸鈉的英文別名

Malonic acid disodium salt; Propanedioic acid, disodium salt; Sodium Malonate; DISODIUM MALONATE 99% puriss; disodium propanedioate; propanedioic acid, monosodium salt, monohydrate

⑤ 丙二酸的抑製作用

如未加特殊說明,本實驗所用溶液的濃度表示法均為百分濃度W/V.
實驗一 轉氨酶GPT活性的測定
【 原 理 】
轉氨酶是體內重要的一類酶.轉氨酶催化α–氨基酸的α–氨基與α–酮酸的α–酮基之間的相互轉化,從而生成一種新的氨基酸與一種新的酮酸,這種作用稱為轉氨基作用.它在生物體內蛋白質的合成,分解等中間代謝過程中,在糖,脂及蛋白質三大物質代謝的相互聯系,相互制約及相互轉變上都起著很重要的作用.
在動物機體中活力最強,分布最廣的轉氨酶有兩種:一種為谷氨酸草醯乙酸轉氨酶(glutamic-Oxaloacetate transaminase簡稱GOT),另一種為谷氨酸丙酮酸轉氨酶(glutamic-pyruvic transaminase簡稱GPT).本實驗以谷氨酸丙酮酸轉氨酶為例.它的催化反應如下:
GPT
丙氨酸 + α–酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸
37℃
由上可見此反應最終產物是丙酮酸.測定單位時間內丙酮酸的產量即可得知轉氨酶的活性.
丙酮酸可與2,4–二硝基苯肼反應,形成丙酮酸二硝基苯腙,在鹼性溶液中呈棕紅色,顯色的深淺在一定范圍內可反映所生成的丙酮酸量多少,與同樣處理的丙酮酸標准液進行比色,計算出其含量,以此測定轉氨酶的活性.
丙酮酸 + 2,4–二硝基苯肼 丙酮酸–2,4–二硝基苯腙(棕紅色)
本實驗用金氏(King)法(1)測定轉氨酶的活性單位為:每毫升血清與基質在37℃下作用60分鍾,生成1μmol丙酮酸為1個單位.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1.1/15 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖溶液:
甲液:1/15 mol/L磷酸氫二鈉溶液:稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4)9.47g(或Na2HPO4 · 12H2O 23.87g)溶解於蒸餾水中,定容至1 000 ml.
乙液:1/15 mol/L磷酸二氫鉀溶液:稱取磷酸二氫鉀(KH2PO4)9.078g,溶解於蒸餾水中,定容至1 000 ml.
取甲液825 ml乙液175 ml混合,測其pH為7.4即1/15 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液.
2.GPT基質液:精確稱取a–酮戊二酸29.2 mg及DL–丙氨酸1.78g,溶於1/15 mol/L pH 7.4的磷酸鹽緩沖液50ml 中溶解,加1mol/L NaOH溶液0.5ml,校正pH至7.4.再以pH 7.4的磷酸緩沖液定容至100ml,充分混合,冰凍貯存.
3.2,4–二硝基苯肼溶液:精確稱取2,4–二硝基苯肼20mg,先溶解於10ml濃鹽酸中(可加熱助溶),再以蒸餾水稀釋至100ml(有沉渣可過濾),棕色瓶內保存.(注意:此溶液配製時釋放大量的熱和難聞氣味配製時應戴上口罩)
4.丙酮酸標准液(1ml = 2μmol丙酮酸即2mmol/L):精確稱取丙酮酸鈉22mg於100ml容量瓶中,用1/15 mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度.此溶液應新鮮配製,不能存放.
5.0.4 mol/L氫氧化鈉溶液:稱取16g氫氧化鈉溶解於蒸餾水中,定容至1 000ml.
6.1mol/L氫氧化鈉溶液:稱取4g氫氧化鈉溶解於蒸餾水中,定容至1 00ml.
7.血清300ml.
二 器材
1.水浴鍋.
2.分光光度計.
【 操 作 】
1.標准曲線製作:取6支試管按下表操作.
試管號
試 劑
1 2 3 4 5 6
丙酮酸標准液 (ml)
GPT基質液 (ml)
PH7.4磷酸緩沖液(ml)
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25
0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
水浴37℃,10分鍾
2,4二硝基苯肼溶液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
保溫37℃,20分鍾
0.4N氫氧化鈉溶液 (ml) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
相當活性(單位數) 空白 100 200 300 400 500
混勻後,用分光光度計在520nm波長處進行比色測定,以空白調零,讀取各管吸光度讀數.以各管相應的轉氨酶活性單位值為橫坐標,吸光度值為縱坐標,用坐標紙繪制標准曲線.
2.GPT測定:取2支潔凈的試管按下表操作.
試 劑 空 白 測 定
血 清 (ml) 0.1 0.1
G PT基質液 (ml) -- 0.5
混勻, 37℃水浴,60分鍾
G PT基質液 (ml) 0.5 --
2,4二硝基苯肼溶液 (ml) 0.5 0.5
混勻, 37℃水浴,20分鍾
0.4mol/L氫氧化鈉 (ml) 5.0 5.0
混勻,放置5分鍾,用分光光度計在波長520nm波長處進行比色測定,以空白調零,讀取測定管吸光度值.
【 實驗結果 】
所測得的吸光度值在已繪制好的標准曲線上直接查對,即可得知待測轉氨酶的活性單位.
【 注意事項 】
1.測定血清中轉氨酶活性主要有金氏 (King) 法,賴氏 (Reitman—Frankel)法和改良穆氏(Mohun)法.這三種方法的原理,試劑和操作方法包括血清和試劑的用量及作用溫度均相同,不同之處是金氏法酶作用時間為60分鍾,而其他二法為30分鍾.因此活性單位定義不同.
2.轉氨酶只作用於L–型氨基酸,對D–型氨基酸無催化能力.實驗中所用的是DL–型的混旋氨基酸.若採用L–型時,則用量比DL–型少一半.
3.所用儀器應清潔,不應含有酸,鹼,Zn2+,Ca2+,Hg2+,Ag+等蛋白沉澱劑.
4.血清不應溶血,因血細胞內轉氨酶含量較多.樣品採集後應當日進行測定,否則應將血清分離後貯存於冰箱.
5.溫度及時間一定要嚴格控制,准確掌握.pH要准確以免影響酶活性.
實驗二 過氧化氫酶及過氧化物酶的作用
【 原 理 】
在生物機體內,某些代謝物由於需氧脫氫的結果而產生對機體有害的過氧化氫.體內的過氧化氫酶能催化過氧化氫分解成水和分子氧,使過氧化氫不致在體內積累.因此,過氧化氫酶具有保護生物機體的作用.
過氧化氫酶是一種以鐵卟啉為輔基的酶,它廣泛存在於動植物組織中.
過氧化物酶也是一種以鐵卟啉為輔基的酶,它能催化過氧化氫釋放出新生態氧以氧化某些酚類和胺類物質,例如,氧化溶於水中的焦性沒食子酸生成不溶於水的焦性沒食子橙(橙紅色).其作用機制如下:
E + H2O2 E–H2O2
E–H2O2 + H2O2 E + 2 H2O + O2
【 試劑和器材 】
一 試劑
2%過氧化氫溶液:此溶液易見光分解,應新鮮配製.
1%焦性沒食子酸溶液:焦性沒食子酸1g,用蒸餾水溶解並配至100ml.此溶液易
氧化,應新鮮配製.
鐵粉.
二 材料
鮮豬肝糜.
馬鈴薯或血液.
白菜梗提取液:白菜梗約5g,切成細塊,置研缽內,加蒸餾水15ml研磨成漿,轉
移出濾液,備用.
【 操 作 】
1.過氧化氫酶的作用
取試管5支,按下表操作:
試管 2% H2O2(ml) 新鮮肝糜 (g) 煮沸肝糜(g) 生馬鈴薯(g) 熟馬鈴薯(g) 鐵粉
1 3 0.5 - - - -
2 3 - 0.5 - - -
3 3 - - 1 - -
4 3 - - - 1 -
5 3 - - - - 少許
加畢,觀察有無氣泡放出,特別是肝糜周圍和馬鈴薯周圍.
2.過氧化物酶的作用
取試管4支,按下表操作:
試管 1%焦性沒食子酸 2% H2O2 蒸餾水 白菜梗提取液 煮沸的白菜梗提取液
(ml) (滴) (ml) (ml) (ml)
1 2 2 2 - -
2 2 - - 2 -
3 2 2 - 2 -
4 2 2 - - 2
搖勻後,觀察並記錄各管顏色變化和沉澱的出現.
實驗三 琥珀酸脫氫酶及丙二酸的抑製作用
【 原 理 】
琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環中的一個重要的酶,測定細胞中有無這種酶可以初步鑒定
三羧酸循環途徑是否存在.琥珀酸脫氫酶可使其底物脫氫,產生的氫可通過一系列傳遞體最後遞給氧而生成水.在缺氧的情況下,若有適當的受氫體也可顯示出脫氫酶的作用.如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下,可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下之氫可將藍色的甲烯藍還原成無色的甲烯白.這樣,便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用.
琥珀酸 + 甲烯藍 琥珀酸脫氫酶 延胡索酸 + 甲烯白
丙二酸的化學結構與琥珀酸相似,它能與琥珀酸競爭而和琥珀酸脫氫酶結合.若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結合,則不能再催化琥珀酸脫氫,這種現象稱為競爭性抑制.如相對地增加琥珀酸的濃度,則可減輕丙二酸的抑製作用.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1.1.5%琥珀酸鈉溶液:取琥珀酸鈉1.5g,用蒸餾水溶解並稀釋至100ml.如無琥珀酸鈉可用琥珀酸配成水溶液後,以氫氧化鈉溶液中和至pH7~8.
2.1%丙二酸鈉溶液:取丙二酸鈉1g,用蒸餾水溶解並稀釋至100ml.
3.0.02%甲烯藍溶液.
4.1/15mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4 · 2H2O 11.88g,用蒸餾水溶解並稀釋至1 000ml.
5.液體石蠟.
二 器材
1.玻璃勻漿器.
2.離心機.
三 材料
新鮮豬心.
【 操 作 】
1.豬心臟制備液:稱取新鮮豬心1.5~2.0g玻璃勻漿器放中,加入等體積的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,搗碎成漿,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置一小時,不時搖動,離心(3000r/min 10 min)取上清液備用.
2.取4支試管,編號並按下表操作:
試管 心臟制備液 1.5%琥珀酸鈉溶液 1%丙二酸鈉溶液 蒸餾水 0.02%甲烯藍溶液
(滴) (滴) (滴) (滴) (滴)
1 5 5 - 10 2
2 5(先煮沸) 5 - 10 2
3 5 5 5 5 2
4 5 10 5 5 2
3.各管溶液混勻後,每管各加液體石蠟一薄層(約5~10滴).為什麼
4.各管置於37℃水浴中,半小時內觀察各管顏色變化,比較其速度並說明原因.然後將第一管用力搖動,觀察其有何變化 為什麼
實驗四 γ–球蛋白的分離
【 原 理 】
中性鹽 (如硫酸銨,硫酸鈉,氯化鈉,硫酸鎂等)對球狀蛋白質的溶解度有顯著影響.隨著中性鹽濃度的增加,離子強度也增加.當溶液離子強度增加到一定數值時,溶液中蛋白質的溶解度開始下降.離子強度增加到足夠高時,蛋白質可從水溶液中沉澱出來,這種現象叫做鹽析.各種蛋白質的溶解度不同,因而可利用不同濃度的高濃度鹽溶液來沉澱分離各種蛋白質.
蛋白質是一種生物大分子,它具有不能通過半透膜的性質.透析就是利用這種性質使之與其它小分子物質如無機鹽,單糖等分開.本次實驗應用的是脫鹽透析,即鹽析後,將含大量鹽類的蛋白質溶液放在半透膜的袋內,再將透析袋浸入蒸餾水中.經過一段時間,袋內的鹽類濃度即逐漸降低.若經常更換袋外的液體,最後即可使袋內的蛋白質溶液中所含的鹽類除凈,從而達到脫鹽的目的.應用不同濃度硫酸銨分段鹽析法將血清中γ–球蛋白及α,β球蛋白分離,最後用透析法脫鹽,即可得到純度較高的γ–球蛋白.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1.pH 7.2,0.01mol/L磷酸鹽緩沖液生理鹽水(簡稱PBS): 取0.2mol/L Na2HPO4溶液36.0ml,0.2mol /L NaH2PO4溶液14.0ml混合,加NaCl 8.5克,用蒸餾水稀釋至1 000ml.
2.pH7.2飽和硫酸銨溶液:用濃氨水將2 000ml飽和硫酸銨溶液調pH到7.2.
3.納氏試劑:
納氏試劑貯存液:於500ml三角燒瓶內加入碘化鉀150克,碘110克,汞50克及蒸餾水l00ml,用力振盪7~15分鍾,至碘色將轉變時,此混合液即產生高熱.隨即將此燒瓶浸於冷水內振盪,直至棕色之碘轉變成帶綠色之碘化鉀汞溶液為止.將上清液傾入2 000ml量筒內,並用蒸餾水洗滌瓶內沉澱物數次.將洗滌液一並傾入量筒內,加蒸餾水至2 000ml刻度後,混勻即成.
納氏試劑應用液:取10%氫氧化鈉700ml,鈉氏試劑貯存液150ml及蒸餾水150ml混勻即成,如顯混濁,可靜置數日後取上清液使用.此試劑之酸鹼度極為重要.用lmol/L鹽酸溶液20ml滴定時,需此試劑11～11.5ml恰好使酚酞指示劑變成紅色時最為適宜.否則必須糾正其酸鹼度.
4.雙縮脲試劑:溶解1.50克硫酸銅(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸鉀鈉(NaKC4H406 · 4H20)於500ml蒸餾水中.在攪拌下加入10%氫氧化鈉溶液300ml,用蒸餾水稀釋到1升,貯存在內壁塗以石蠟的瓶中,可長期保存.
5.濃蔗糖液:蔗糖的飽和溶液.
6.10%氫氧化鈉:取10克氫氧化鈉溶解於蒸餾水中,定容至100ml.
二 器材
1.透析袋.
2.磁力攪拌器.
3.離心機.
三 材料
兔血清
【 操 作 】
一 鹽析
1.取離心管1支加入血清2ml,再加入等量PBS稀釋血清,搖勻後,逐漸加入pH7.2飽和硫酸銨溶液2ml(相當於33%飽和度硫酸銨),邊加邊搖.然後靜止半小時,再離心(3 000r/min)20分鍾,傾去上清液(主要含白蛋白).
2.用lml PBS將離心管底部的沉澱攪拌溶解,再逐滴加飽和硫酸銨溶液0.5m1.搖勻後放置半小時,離心(3 000r/min)20分鍾,傾去上清液(主要含α,β球蛋白),其沉澱即為初步純化的γ–球蛋白.如要得到更純的γ–球蛋白,可重復鹽析過程1～2 次.
3.把提取的γ–球蛋白用1 mlPBS懸浮.
二 透析脫鹽與濃縮
1.將鹽析得到的γ–球蛋白放入透析袋內,用線繩縛緊上口,用玻璃棒懸在盛有半杯蒸餾水的100ml燒杯中,使透析袋下半部浸入水中.
2.將燒杯放在磁力攪拌器上攪拌1小時以上(中間換水1～2次),然後將透析袋取下.小心將線繩解開,吸取袋內的液體,與燒懷中的水同時用雙縮脲試劑檢查袋內外的蛋白質,用納氏試劑檢查袋內外液體中的銨離子(NH4+),觀察透析法的脫鹽效果.
3.脫鹽後得到的γ–球蛋白溶液可繼續濃縮,即用透析袋裝好懸於盛有10ml濃蔗糖或聚乙二醇溶液的小燒杯內1小時以上,觀察袋內液體體積的變化.
實驗五 γ–球蛋白含量測定(光度分析法)
【 原 理 】
雙縮脲法是蛋白質光度分析法的一種,是利用蛋白質的雙縮脲反應而測定蛋白質含量的方法.因蛋白質含有兩個以上的肽鍵,所以有雙縮脲反應.在鹼性溶液中蛋白質與Cu2+形成紫紅色絡合物,其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比,而與蛋白質的分子量及氨基酸成分無關.在一定的實驗條件下,未知樣品溶液與標准蛋白質溶液同時反應,並於540~560nm測定,即可以通過標准蛋白質的標准曲線求出未知樣品的蛋白質濃度.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1.標准酪蛋白溶液(5mg/ml):用0.05mol/L NaOH溶液配製:5g酪蛋白加0.05mol/L NaOH溶液至1 000ml.
2.雙縮脲試劑:溶解1.5g硫酸銅(CuSO4 · 5H2O)和6.0 g酒石酸鉀鈉(NaKC4H4O6 · 4H2O)於500ml蒸餾水中.在攪拌下加入10% NaOH溶液300ml,用蒸餾水稀釋到1升,貯存在內壁塗有石蠟的瓶中,可長期保存.
3.未知蛋白質溶液:γ–球蛋白溶液.
二 器材
分光光度計.
【 操 作 】
1.標准曲線的繪制:取6支試管按下表操作.
試 劑 1 2 3 4 5 6
標准酪蛋白溶液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
蒸餾水 (ml) 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0
雙縮脲試劑 (ml) 4 4 4 4 4 4
室溫下(15~25℃)放置30分鍾,用分光光度計於540nm測定.以光密度為縱坐標,酪蛋白含量為橫坐標用坐標紙繪制標准曲線.
2.γ–球蛋白溶液濃度的測定:取3支試管按下表操作.
試 劑 空白管 測定1 測定2
γ–球蛋白溶液(ml) - 1 1
蒸餾水 (ml) 2 1 1
雙縮脲試劑 (ml) 4 4 4
搖勻,放置30分鍾,540nm測定讀取光密度.
【 實驗結果 】
求出待測蛋白質溶液的光密度後,從標准曲線上查出其蛋白質濃度,按稀釋倍數求出每毫升蛋白質溶液的蛋白質含量.
實驗六 凝膠柱層析法(γ–球蛋白純化)
【 原 理 】
凝膠層析(gel chromatography),又稱為凝膠過濾(gel filtration),分子篩過濾(molecular sieve filtration),凝膠滲透層析(gel osmotic chromatography)等.它是20世紀60年代發展起來的一種層析技術.其基本原理是利用被分離物質分子大小不同及固定相(凝膠)具有分子篩的特點,將被分離物質各成分按分子大小分開,達到分離的方法.
凝膠是由膠體粒子構成的立體網狀結構.網眼裡吸滿水後凝膠膨脹呈柔軟而富於彈性的半固體狀態.人工合成的凝膠網眼較均勻地分布在凝膠顆粒上有如篩眼,小於篩眼的物質分子均可通過,大於篩眼的物質分子則不能,故稱為"分子篩".凝膠之所以能將不同分子的物質分開是因為當被分離物質的各成分通過凝膠時,小於篩眼的分子將完全滲入凝膠網眼,並隨著流動相的移動沿凝膠網眼孔道移動,從一個顆粒的網眼流出,又進入另一顆粒的網眼,如此連續下去,直到流過整個凝膠柱為止,因而流程長,阻力大,流速慢;大於篩眼的分子則完全被篩眼排阻而不能進入凝膠網眼,只能隨流動相沿凝膠顆粒的間隙流動,其流程短,阻力小,流速快,比小分子先流出層析柱;小分子最後流出.分子大小介於完全排阻不能進入或完全滲入凝膠篩眼之間的物質分子,則居中流出.這樣被分離物質即被按分子的大小分開.
用於凝膠層析的凝膠均為人工合成的產品,主要有交聯葡聚糖(商品名為Sephadex),瓊脂糖(商品名為Sepharose),聚丙烯醯胺凝膠(商品名為Bio–gel)及具有一定網眼的細玻璃珠等和這些凝膠的衍生物.
本實驗主要介紹葡聚糖凝膠,這是由葡萄糖的多聚物與1–氯–2,3–環氧丙烷 (CH2—CH—CH2C1)交連而成.環氧丙烷引入丙三醇基將鏈狀的多聚葡萄糖單位交聯起來,凝
\/
O 膠網眼的大小由多聚葡萄糖的分子和環氧丙烷的比例(交聯度)來控制.
葡聚糖具有較強的親水性,在水和電解質溶液中膨脹成為柔軟而富於彈性的凝膠,其吸水能力與葡聚糖凝膠的交聯度有密切關系.交聯度大的,孔徑小,吸水少,膨脹的程度小;交聯度小的,孔徑大,吸水多,膨脹的程度大.因此,葡聚糖凝膠孔徑的大小可以其吸水量的大小來表示,常以G–10至G–200號碼標記.G後面的數字是其吸水量(毫升水/克干膠)乘以10所得的值.如G–25即表示吸水量為2.5ml/g干膠.市售有G–10,G–25,G–50,G–75,G–100,G–150,G–200等型號.G–75以上的膠因吸水量大,膨脹後形態柔軟易變,統稱為軟膠.G–75以下的稱為硬膠.
葡聚糖凝膠可分離的分子大小從幾百到數十萬.可根據被分離物質的分子大小及目的選擇使用.一般說Sephadex G–l0～15通常用於分離肽及"脫鹽".Sephadex G–75～200用以分離各類蛋白質.
凝膠層析是一種物理分離法.葡聚糖凝膠基本上不帶電荷呈多惰性,不與被分離物質發生反應,所以分離的效果較好.然而由於它是葡萄糖的聚合物,因而仍有少量活性羥基,能吸附少量蛋白質等被分離的物質.為了克服這個缺點,一般使用含有離子強度達0.08的NaCl等中性鹽緩沖液作洗脫液.
本實驗採用凝膠過濾法純化γ–球蛋白,除去其中的硫酸銨,以達到純化目的.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1.實驗二提取出的γ–球蛋白
2.磷酸鹽緩沖液(pH6.7,0.0175mol):取0.2mol/L Na2HPO4溶液43.5ml,0.2mol/L NaH2PO4溶液56.6ml混合,用蒸餾水稀釋至1 000ml.
3.Sephadex G–25.
4.奈氏試劑
5.20%磺醯水揚酸
6.洗脫液:磷酸鹽緩沖液(pH 7.0,0.01mol) 取0.2mol/L Na2HPO4溶液30.5ml,0.2mol /LNaH2PO4溶液19.4ml混合,加NaCl 8.5克,用蒸餾水稀釋至1 000ml.
二 器材
1.lcm×20cm層析柱
2.洗脫瓶.
3.部分收集器
恆流泵
5.監測儀
【 操 作 】
1.凝膠處理:溶脹(水化):商品葡聚糖凝膠和聚丙烯醯胺凝膠均為乾燥顆粒,使用前必須水化溶脹.商品瓊脂糖凝膠呈懸浮膠體可直接用,玻璃球不用溶脹.
凝膠溶脹有兩種方法:一種是將所需葡聚糖凝膠浸入蒸餾水中於室溫下溶脹;另一種 是置於沸水浴中溶脹.各種葡聚糖在上述溶脹方法中所需的時間見實驗原理部分.
必須浸泡足夠的時間以使凝膠充分溶脹.兩種方法中,沸水浴溶脹不但節省時間,還可以殺滅凝膠中污染的細菌並排出網眼.
凝膠溶脹後,需用蒸餾水洗滌幾次,每次應將沉降緩慢的細小顆粒隨水傾倒出去,以免在裝柱後產生阻塞現象,降低流速.洗後將凝膠浸泡在洗脫液中待用.
一支層析柱中應該裝入的干膠量可以用下法推算:稱取1g所需型號的葡聚糖干膠,放在5ml量筒中,用室溫溶脹的方法充分溶脹,觀察溶脹後凝膠的體積.然後在層析柱中加水到所需柱床高度,將水倒出,量取柱床體積.根據1g干膠溶脹後的體積和所需柱床體積,即可推算出干膠的需要量.
2.裝柱 將層析劑裝入柱中進行層析的方法稱柱層析法.作層析用的柱子稱層析柱.層析柱有玻璃和透明塑料的兩種.柱子的一端為進口,另一端為出口,出口端底部有燒結玻璃砂板或尼龍布,能阻止層析劑流出,溶劑則可流過.如果沒有市售的層析柱,可以選用粗細均勻,長短合適的玻璃管,在兩端塞上合適的膠塞,膠塞中插人細玻璃管,在一端放一層尼龍布為出口,即可作為層析柱使用.層析柱的長短粗細根據實驗的目的而定,一般說來,凝膠層析時柱越長,分離效果越好.但柱過長,層析時間長,樣品易稀釋造成擴散,反而影響分離效果.柱的內徑不宜較細,直徑1cm以下的柱易發生"管壁效應",即柱中部分的物質組分移動較快,管壁周圍的則移動較慢,造成分離混亂.當然柱的內徑也不宜過粗.
凝膠層析中,在把小分子物質(mw<1 500),如無機或其他物質與大分子物質 (mw0.5ml/支).
配製測定試劑:1號試劑:2號試劑:3號試劑=1.0:0.1:0.1,混勻.臨用前視需要量配製,現用現配.
二 器材
1.水浴鍋
2.分光光度計
三 材料
血清
【 操 作 】
試劑測定管(U) 標准管(S) 空白管(B)
血清 (μl)(1:5) 30 – –
標准液 (μl) – 30 –
測定試劑 (ml) 0.6 0.6 0.6
蒸餾水 (ml) 0.25 0.25 0.28
4號應用液(ml) 0.15 0.15 0.15
充分混勻,置37℃水浴30分鍾
顯色劑 (ml) 1.0 1.0 1.0
血清(1:5):0.1ml+0.4ml生理鹽水1:5稀釋後使用.
混勻,室溫10分鍾後,分光光度計550nm,1cm厚度比色杯比色,用蒸餾水調零.
酶活性單位表示:SOD抑制率達50%時所對應的SOD量為一個單位.結果以每毫升酶單位表示.
【 實驗結果 】
SOD U/ml = B-U/B-S×33.3×標准液體積/樣品的體積
=B-U/B-S×33.3×30/30×1000/5000
=B-U/B-S×167
正常參考值:人血清SOD:59.5±17.1U/ml(血清取樣量6μl)
實驗十七 等電聚焦法測定SOD等電點
【 原 理 】
等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質,當通以直流電時,兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度,當蛋白質放進此體系時,不同的蛋白質即移動到或聚焦於與其等電點相當的pH位置上.等電聚焦的優點是:有很高的解析度,可將等電點相差0.01-0.02 pH單位的蛋白質分開;一般電泳由於受擴散作用的影響,隨著時間和所走的距離加長,區帶越走越寬,而等電聚焦能抵消擴散作用,使區帶越走越窄;由於這種電聚焦作用,不管樣品加在什麼部位,都可聚焦到其電點,很稀的樣品也可進行分離;可直接測出蛋白質的等電點,其精確度可達0.01pH單位.
載體兩性電解質必需具備的條件:(1)在等電點處必需有足夠的緩沖能力,以便能控制pH梯度,而不致被樣品蛋白質或其他兩性物質的緩沖能力改變pH梯度的進程. (2)在等電點必需的足夠高電導,以便使一定的電流通過,而且要求具備不同pH值的載體有相同的電導系數,使整個體系中的電導均勻,如果有局部電導過小,就會產生極大的電位降,從而其他部分電壓就會太小,以致不能保持梯度,也不能使應聚焦的成分進行電遷移,達到聚焦.(3)分子量要小,便於與被分離的高分子物質用透析或凝膠過濾法分開. (4)化學組成應不同於被分離物質,不幹擾測定.(5)應不與分離物質反應或使之變性.總起來說,當一個兩性電解質的等電點介於兩個很近的pk值之間時,它在等電點的解離度大,緩沖能力強,而且電導系數高,這就是好的載體兩性電解質.
理想的載體兩性電解質的合成:具有幾個pH值很相近的多乙烯多胺(如五乙烯六胺)為原料,與不飽和酸(如丙烯酸)發生加合反應:加合反應優先加在α,β飽和酸的β碳原子上,調節胺和酸的比例可以加上一個或多個羧基,這種合成方法與一般有機會合成不同,有機合成一般要求合成的產物越純越好,而這里要求合成出的產物越復雜越好,要有多異構物和同系物,以保證的很多具有不同而又互相接近的pK值和pI值,從而得到平滑的pH梯度.載體兩性電解質的等電點在pH3-10的范圍,分子量在300-1000之間,它們的緩沖能力等於或優於組氨酸,電導性能良好,可以使電場強度分布較均勻,它們的水溶性良好,在1%水溶液中的紫外吸收值(260mμ)很低.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1. 1mol/LNa3PO3
2. 1mol/LNaOH
3. 1%甘氨酸
4.染色液:0.2%考馬斯亮藍
5.10%三氯乙酸
6.5%磺基水楊酸
7.電泳儀
8.脫色液:35%無水乙醇與10%冰乙酸等體積混和
9.20%甘油
二 器材
1.微量注射器
2.薄層膠片
3.濾紙
三 材料
透析後的蛋白質樣品
【 操 作 】
1.薄層膠片的灌制
(1)配製凝膠溶液(2)架制膠室(3)灌膠(4)保存
2.樣品的預處理:透析除鹽,用1%甘氨酸或載體兩性電解質為溶劑溶解透析後的蛋白質樣品.
3.樣品的施加: 將濾紙(擦凈紙)剪成0.4×0.5cm2的小方塊,先貼在膠質上,再用微量注射器滴加一定量的樣品.
4.電極液的施加:電極液採用1mol/LNa3PO3為正極液,1mol/LNaOH為負極液.用濾紙條浸潤電極液,然後分正負極,貼加在薄層膠片的兩端.
5. 電泳的條件: 4℃下電泳或室溫通冷凝水電泳.起始電壓為60V,15分鍾調至120V,轉而恆流(每cm膠片長度0.8-1.0mA),約1小時左右,電壓便上升到600～700V,再轉而恆壓600V或700V,維持3～3.5小時即可結束電泳.
6.pH梯度的測定: 把1×7 cm2薄層膠片切下來,分成14等分,每份加0.4ml重蒸水,攪碎後,測出pH.
7.染色及保存: 蛋白質染色步驟:5%磺基水楊酸與10%三氯乙酸等體積混合固定1小時;置脫色液(35%無水乙醇與10%冰乙酸等體積混勻)45min;0.2%考馬斯亮藍R250的脫色液溶液(W/V)染色30min;置脫色液中,37℃溫箱內過夜.染色後的膠片可放在20%甘油中,也可製成乾片.
8.等電點的測定: 測定染色後所分離的區帶距正極端的長度,按pH曲線找出其相應的等電點.
實驗十八 牛乳中酪蛋白磷酸肽的制備
【 原 理 】
牛乳中含豐富的蛋白質,其中主要是酪蛋白.酪蛋白在牛乳中約占總蛋白量的5/6.酪蛋白是一種含磷蛋白的不均一混合物.蛋白質在其等電點pH溶液中溶解度降低.將牛乳的pH調整至4.8,即酪蛋白的等電點時,酪蛋白即沉澱出來.用乙醇除去酪蛋白沉澱中不溶於水的脂肪,得到純的酪蛋白.牛乳酪蛋白中含有磷酸肽,其活性中心是磷酸化的絲氨酸和谷氨酸簇,是最有效的促鈣吸收因子.酪蛋白經酶水解可產生酪蛋白磷酸肽.氮磷比是評價CPP產品質量的最重要指標,氮磷比(N/P)越小,則CPP產品中磷酸基密度越高和肽鏈越短,它促進人體對鈣吸收的生理活性也越高,N/P一般應小於7.5.
【 試劑和器材 】
一 試劑
1.乙酸鈉緩沖液(0.2mol/L pH4.6)
2.1%NaOH
3.10%乙酸
4.乙醇
5.乙醚
6.0.1mol/LnaOH
7.胰蛋白酶
8.pH7.4,0.1mol/LTris-HCl緩沖液
二 器材
1.pH計
2.離心機
3.表面皿
4.
三 材料
1.新鮮牛乳
2.酪蛋白
【 操 作 】
酪蛋白的制備
取新鮮牛乳300ml,放入250ml燒杯中加熱至40℃.加入100ml加熱至同樣溫度的乙酸鈉緩沖液,一邊加一邊搖動,並用pH計檢測,調整混合液的pH為4.8(用1%NaOH或10%乙酸進行調整).冷卻至室溫,繼續放置5分鍾,離心(2500r/min,20min)獲沉澱物,用少量蒸餾水洗幾次,過濾.將洗凈的沉澱物懸浮在約 30ml乙醇中,離心得沉澱,用乙醇和乙醚等量混合液洗滌兩次,最後用50ml乙醚洗一次.取出抽乾的粉狀物,攤開在表面皿上,使乙醚完全揮發.

⑥ 丙二酸鈉乾燥時50度就融化了

很簡單嘛，就是該物質的熔點太低了，像磷就是這樣，所以在保存的時候，就要保證在五十度的溫度以下，但也不是越低越好，主要還是看它的分子動態，內能。以便在最合適的溫度下保存

⑦ 丙二酸鈉注冊商標屬於哪一類

丙二酸鈉屬於商標分類第1類0102群組；
經路標網統計，注冊丙二酸鈉的商標達1件。
注冊時怎樣選擇其他小項類：
1.選擇注冊（2-氟乙醇，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
2.選擇注冊（5-氯代水楊酸，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
3.選擇注冊（D-苯甘氨醯胺，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
4.選擇注冊（L-苯甘氨醯胺，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
5.選擇注冊（N.A酸酐，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
6.選擇注冊（一乙胺鹽酸鹽，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
7.選擇注冊（一氫澳化肼，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
8.選擇注冊（一甲胺鹽酸鹽，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
9.選擇注冊（丁二酸，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%
10.選擇注冊（三乙胺鹽酸鹽，群組號：0102）類別的商標有1件，注冊佔比率達100%

⑧ 丙二酸鈉的英文名稱

Sodium malonate；Malonic acid, disodium salt；malonic acid, sodium salt；disodium malonate；propanedioic acid, disodium salt；malonic acid disodium salt monohydrate；Sodium propanedioate；Malonic acid,disodium salt；sodiummalonate